ساخت ناقل لنتی ویروسی بر پایه ویروس hiv-۱ با کاربری انتقال ژن به سلول های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده

نویسندگان

المیرا محمدی

فایزه خزیمه

ماندانا بهبهانی

زهرا گلستان نژاد

محمدرضا گلستان نژاد

چکیده

مقدمه: روش های زیستی انتقال ژن یا استفاده از ناقل­های ویروسی، کاربرد گسترده ای در اهداف درمانی دارد. استفاده از ناقل های لنتی ویروسی با داشتن مزایایی چون توانایی آلوده­سازی سلول­های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده، توان حمل قطعه ی ژنی بزرگ و بیان پایدار ژن خارجی، ابزاری مناسب برای انتقال ژن در کاربردهای تحقیقاتی و درمانی به شمار می آیند. هدف از این پژوهش تولید یک ناقل لنتی ویروسی بر مبنای hiv-1(human immunodeficiency virus) با پوششی از ویروس وزیکولار استوماتیس(vesicular stomatitis virus glycoprotein-g: vsvg) بود. این ناقل می تواند به عنوان وسیله ای برای انتقال ژن به سلول­های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده، در انواع مطالعات تحقیقاتی و درمانی، مورد استفاده قرار بگیرد. مواد وروش ها: روش کلسیم فسفات برای ترنسفکشن همزمان سه پلاسمید شامل پلاسمید بیان کننده ژن خارجی به همراه گزارشگر بیانی(pwpxl-gfp)، پلاسمید بیان کننده پروتئین­های gag و pol(pspax2) و پلاسمید بیان کننده گلیکوپروتئین پوشش(pmd2.g)، بر روی رده سلولی کلیه جنین انسان، انجام گرفت. تایید ترانسفکشن با استفاده از فلوسیتومتری انجام گرفت و پس از تغلیظ ویروس ها، ترانسداکشن بر رده سلولی هدف انجام شد. یافته ها: نتایج فلوسیتومتری بیان 37/ 51 درصد از ژن گزارشگر پروتئین سبز فلورسانت(green fluorescent protein:gfp) را در سلول­های ترانسفکت شده نشان داد. پس از تغلیظ ویروس و انجام ترانسداکشن؛ دخول پروویروس به ژنوم سلول هدف و بیان طولانی مدت gfp در این سلول­ها با مشاهده به وسیله میکروسکوپ فلورسانت، 15روز پس از ترانسداکشن ارزیابی شد و نتایج مثبت گزارش شد. نتیجه گیری: بیان ژن گزارشگر در سلول ها،پس از ترانسداکشن، صحت ورود ناقل ویروسی را به سلول ها نشان داد و به این ترتیب ناقل تولید شده در این پژوهش علاوه بر کارایی انتقال ژن به دلیل ماهیت لنتی ویروسی آن، توانایی انتقال ژن به سلولهای غیر تقسیم شونده را نیز علاوه بر سلول های تقسیم شونده دارا می­باشدکه موجب کاربرد گستره تر آن، نسبت به سایر ناقل های ویروسی، در مطالعات انتقال ژن میشود.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

ساخت و تولید لنتی ویروس های ناقل ژن گلوتاتیون پراکسیداز و انتقال به سلول های انسان

پارکینسون رایج ترین بیماری نورودژنراتیو بعد از آلزایمر است که دارای شیوع 1 تا 2 درصد در افراد بالای 50 سال می باشد. نشانه های کلینیکی پارکینسون وقتی که سطح دوپامین مغز از 60% سطح طبیعی آن پائین تر بیاید بروز می کنند. علت مرگ نورون های دوپامینرژیک در این بیماری هنوز مشخص نشده است اما در 2 دهه اخیر استرس اکسیداتیو و نقص عملکرد میتوکندریایی به عنوان عاملان اصلی در نورودژنراسیون این نورونها شناخته ...

15 صفحه اول

مقایسه تأثیر وضعیت طاق باز و دمر بر وضعیت تنفسی نوزادان نارس مبتلا به سندرم دیسترس تنفسی حاد تحت درمان با پروتکل Insure

کچ ی هد پ ی ش مز ی هن ه و فد : ساسا د مردنس رد نامرد ي سفنت سرتس ي ظنت نادازون داح ي سکا لدابت م ي و نژ د ي سکا ي د هدوب نبرک تسا طسوت هک کبس اـه ي ناـمرد ي فلتخم ي هلمجزا لکتورپ INSURE ماجنا م ي دوش ا اذل . ي هعلاطم ن فدهاب اقم ي هس عضو ي ت اه ي ندب ي عضو رب رمد و زاب قاط ي سفنت ت ي هـب لاتـبم سراـن نادازون ردنس د م ي سفنت سرتس ي لکتورپ اب نامرد تحت داح INSURE ماجنا درگ ...

متن کامل

طراحی و ساخت حامل لنتی ویروسی بیان کننده miRNA-499a و انتقال آن‌ به سلول ‌های بنیادی مزانشیمی انسان

Background and purpose: Lentiviral vectors (LVs) are suitable candidates for gene delivery to cells with stable and high-level of transgene expression in target cells. MicroRNAs (miRNAs, miRs) are non-protein coding, short (~22 nucleotides) and single-stranded RNAs that act as post-transcriptional regulators of gene expression, and are involved in various cellular processes, including prolifera...

متن کامل

ساخت یک سازه بهینه شده لنتی ویروسی نوترکیب حاوی ژن pdx-۱ برای انتقال ژن به سلول های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع ۱

چکیده زمینه و هدف: امروزه بسیاری از پروتکل های ژن درمانی با حامل های لنتی ویروسی انجام می شود. یکی از مهم ترین فاکتورهایی که در تکوین پانکراس و رونویسی ژن انسولین نقش دارد فاکتور رونویسی pancreatic & duodenal homeobox 1 (pdx-1) است. هدف از این مطالعه بهینه سازی سازه لنتی ویروسی حاوی ژن pdx-1 برای ترانسفکشن سلول های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع 1 بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی ابتدا...

متن کامل

همسانه سازی ژن sox۲ انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلول های hek۲۹۳t

چکید ه   سابقه و هدف   ژن sox2 در میان گونه ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلول های پیش ساز از سلول های تمایز یافته می باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلول های پیش ساز می شود. sox2 ، oct4 ، cmyc و klf4 سبب باز برنامه نویسی سلول های سوماتیک به سلول های بنیادی می شوند. امروزه از ژن sox2 در جهت تولید سلول­های ips و سلول درمانی استفاده می شود. در این تحقیق همسانه سازی ژن sox2 در ناقل...

متن کامل

همسانه‌سازی ژن SOX2 انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلول‌های HEK293T

  چکید ه   سابقه و هدف   ژن SOX2 در میان گونه‌ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلول‌های پیش‌ساز از سلول‌های تمایز یافته می‌باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلول‌های پیش‌ساز می‌شود. SOX2 ، OCT4 ، cMYC و KLF4 سبب باز برنامه‌نویسی سلول‌های سوماتیک به سلول‌های بنیادی می‌شوند. امروزه از ژن SOX2 در جهت تولید سلول­های iPS و سلول درمانی استفاده می‌شود. در این تحقیق همسانه‌سازی ژن SOX2 در نا...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
مجله دانشکده دندانپزشکی اصفهان

جلد ۱۱، شماره ۵، صفحات ۳۹۶-۰

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023